Asparagine synthase Assay Kit (Spectrophotometry)

AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0031S-A体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0031S-A），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：CB0031S-A体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0031S-A），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）等液体样品：直接测定。

三、测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2. 标准品准备：临用前用蒸馏水将标准品稀释至5、4、3、2、1、0.5、0 μg/mL。
3. 样品测定（在EP中加入下列试剂）：

注：对照管和标准曲线各只要做1-2次。
四、AS酶活性计算：

1. 标准条件的建立：
2. 以浓度（x）为横坐标，标准品吸光度（y）为纵坐标建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（ΔA=A 测定管-A 对照管）带入公式中计算样本浓度x（μg/mL）。
3. 血清（浆）AS活性计算：

单位定义：每mL血清（浆）每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS (U/mL) = x ×V 反总÷V 样÷T = 21x
组织、细菌或细胞中AS活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力 (U/mg prot) =x ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 21x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每小时产生1μg氨定义为一个酶活力单位。
AS活力 (U/g 鲜重) = x ×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =21x÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力 (U/10⁴ cell) = x ×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.042x
注：T：反应时间，1h；V 反总：反应体系总体积：0.525mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V 样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。