Ascorbic Acid Oxidase Activity Assay Kit (Microanalysis)

AAO 可直接氧化 AsA，通过测定 AsA 的氧化量，可计算得 AAO 活力。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
二、粗酶液提取：

1. 按照组织质量（g）：CB0030M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0030M-A）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 265 nm。
2. 将CB0030M-B在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3. 在微量石英比色皿/96 孔板中加入：

四、 AAO 活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按蛋白浓度计算

AAO 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
AAO (nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁹÷(Cpr×V 样)÷T = 92.4×△A÷Cpr
2. 按样本质量计算

AAO 活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
AAO (nmol/min/g) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁹÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 92.4×△A÷W
注： ε：AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×10⁴ L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶ μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL）；W ：样品 质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL = 0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：催化反应时间（min），2min。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 按蛋白浓度计算

AAO 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
AAO (nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T = 184.8×△A÷Cpr
2. 按样本质量计算

AAO 活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
AAO (nmol/min/g) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 184.8×△A÷W
注： ε：AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×10⁴ L/mol/cm；d：96 孔板光径（cm），0.5 cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL）；W ：样品 质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL = 0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL； T：催化反应时间（min），2min。

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行。
2. 配制好的试剂放在 4℃保存，三天内使用完。
3. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。