Ascorbic Acid Assay Kit (UV Spectrophotometry)

抗坏血酸氧化酶 (AAO) 催化 AsA 氧化生成 DHA，通过测定 AsA 的氧化速率，即可计算出 AsA 含量。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
二、试剂预配制：
CB0029UV-C：临用前加入 6.25mL CB0029UV-B混匀备用。
CB0029UV-标准品：临用前配制，加入 5.679 mL 蒸馏水充分溶解；吸取0.04 mL 上述溶液，加入 0.96 mL 蒸馏水，混匀，即 400μmol/L AsA。
三、AsA提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：CB0029UV-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0029UV-A）进行冰浴匀浆；8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0029UV-A体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0029UV-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。

四、检测步骤：

1. 紫外分光光度计预热 30min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。
2. CB0029UV-B置于 25℃水浴中预热30min。
3. 按顺序加入下列试剂：

注：标准管只需要测定1-2次。
计算公式：
按蛋白浓度计算

AsA (nmol/mg prot) = [C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 样]÷(Cpr×V 样)
= 400×△A 测定管÷△A 标准管÷Cpr
按样本质量计算

AsA (nmol/g) = [C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 样]÷(W×V 样÷V 样总)
=400×△A 测定管÷△A 标准管÷W
按细胞数量计算

AsA (nmol/10⁴ cell) = [C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 样]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)
= 400×△A 测定管÷△A 标准管÷细胞数量
按液体体积计算

AsA (nmol/mL) = [C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 样]÷V 样
= 400×△A 测定管÷△A 标准管
注：C标准液：400μmol/L=400nmol/mL；V 样总：上清液总体积，1.0 mL；V 样：加入反应体系中 上清液体积，0.1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）；细胞数量：10⁴为单位计量，万。

1. CB0029UV-C 和标准品现配现用，配制好的 4℃保存，3 天内使用完。
2. 如果样本初始吸光值大于1.4，建议将样本用CB0029UV-A稀释后进行测定。
3. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。