Anthocyanin Assay Kit (Microanalysis)

采用pH示差法测定花色苷含量，当pH为1.0时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在530处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值。pH示差法减少了溶液pH和溶剂差异的影响，排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
二、花色苷的提取：
按照烘干样品质量（g）：提取液CB0027M-ES体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g烘干样品，加入1mL CB0027M-ES），充分匀浆后转移到EP管中，CB0027M-ES定容至1 mL，盖紧后60℃浸提0.5 h，期间可震荡数次，8000 g，常温离心10 min，取上清液待测。
三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上；CB0027M-A和CB0027M-B室温（25℃）预热10min以上。
2.取20 µL上清液和180 µL CB0027M-A（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm和700nm处的吸光值，分别记为A1和A2。
3.取20 µL上清液和180 µL CB0027M-B（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm和700nm处的吸光值，分别记为A3和A4。
4.计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注：如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积200 µL不变，如10 µL上清液和190 µL CB0027M-A（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100 µL上清液和100 µL CB0027M-A（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1-1范围内，可提高检测灵敏度；同样调整上清液和CB0027M-B体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。
四、花色苷含量计算：
a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
花色苷含量（µg/g干重）= [ΔA×V÷(ε×d)×M×F×10⁶]÷W = 16.7×ΔA× F÷W
V：提取液体积，1×10^-3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；10⁶：1g=10⁶µg；W：样本干重：g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
花色苷含量（µg/g干重）= [ΔA×V÷(ε×d)×M×F×10⁶]÷W = 33.4×ΔA× F÷W
V：提取液体积，1×10^-3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴ L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；10⁶：1g=10⁶µg；W：样本干重：g。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。