ANR Assay Kit (Microanalysis)

花青素还原酶在NADPH存在的条件下作用于飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和NADP，使反应体系在340nm处的吸光值下降，吸光值下降速率反应了花青素还原酶的活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、研钵、低温离心机、蒸馏水。
二、酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：提取液CB0026M-ES体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0026M-ES），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.液体：直接检测。
三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至500nm。
2.操作表：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T = 80.39×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每克组织每分钟催化1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T = 80.39×ΔA÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 80.39×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0092x+0.0002，R²=0.999
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T = 160.78×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每克组织每分钟催化1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T = 160.78×ΔA÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义：在40℃，pH6.5条件下，每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 160.78×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，20min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。