Amino Acid Content Assay Kit (Spectrophotometry)

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定 570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

50T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
二、样品处理：
1.按照组织质量（g）：CB0021S-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL CB0021S-A）进行室温匀浆，然后转移到 1.5 mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15 min；自来水冷却后，8000g，4℃离心 10min，上清液置冰上待测。
2.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0021S-A体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0021S-A），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.血清等液体：吸取 0.5mL 液体加入 0.5mL CB0021S-A，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15 min；自来水冷却后，8000g，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。
三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 570 nm，蒸馏水调零。
2.标准品稀释：取适量20μmol/mL 标准液加入蒸馏水稀释得到10μmol/mL标准溶液进行实验。
3.取 1.5mL 离心管，按下表进行操作：

四、氨基酸含量计算公式：
（1）按蛋白浓度计算
氨基酸含量 (μmol/mg prot) = [C标准品×V标准品×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白)]÷（V样×Cpr）=10×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白)÷Cpr
（2）按样本质量计算
氨基酸含量 (μmol/g) =[C标准品×V标准品×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白)] ÷（V样÷V样总×W）=10×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白)÷W
（3）按细菌或细胞数量计算
氨基酸含量 (μmol/10⁴ cell) =[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)] ÷（V样÷V样总×500）=0.02×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
（4）按照液体体积计算
氨基酸含量 (μmol/mL) =[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]÷V样×2=20×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
注： C标准品：标准品浓度，10μmol/mL；V标准品：反应体系中加入标准品体积，0.05mL；W：样品质量，g；V样：反应体系中加入样品提取液体积，0.05mL；V样总：样品提取液总体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细菌或细胞总数，500万个；2：提取液体时的稀释倍数。

1.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在570nm处无吸收峰，因此570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。
2.因提取过程中会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算时需用 PBS 或生理盐水单独提取后再测定。
3.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。