ADPG Pyrophosphorylase Assay Kit (Microanalysis)

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 (AGPase) 催化1-磷酸葡萄糖生成ADPG。AGPase催化逆向反应生成1-磷酸葡萄糖，添加磷酸已糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶，可生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH。在340nm下测定NADPH增加速率，可计算出AGPase活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mLCB0015M-ES），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.CB0015M-A在 30℃水浴锅中预热 10 min以上。
3.在 EP 管中按顺序加入下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将CB0015M-A和CB0015M-B按 比例配成混合液 1）：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T = 2813×ΔA÷Cpr
2.按照样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T = 2813×ΔA÷W
注： V反总：反应体系总体积，2.8×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.008 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP (nmol/min /mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T = 5626×ΔA÷Cpr
2.按照样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP (nmol/min /g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 5626×ΔA÷W
注： V反总：反应体系总体积，2.8×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.008 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。