ACL Assay Kit (Microanalysis)

ACL在ATP和辅酶A存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定NADH减少速率，计算ACL活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。
二、样本的前处理：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0013M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0013M-ES），进行冰浴匀浆；于4℃，8000g离心10min，取上清，置于冰上待测。
3.血清（浆）或其他液体：直接检测。
三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.工作液的配置：将CB0013M-B和CB0013M-C转移至CB0013M-A中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；（注意：可取少量CB0013M-A至CB0013M-B和CB0013M-C中，充分混匀溶解后转移至试剂A瓶中，重复2-3遍）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3.样本测定（在微量石英比色皿或96孔板中加入）：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.血清（浆）ACL活力计算：
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 1608×ΔA
2.组织、细菌或细胞中ACL活力计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 1608×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 1608×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 3.216×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下：
1.血清（浆）ACL活力计算
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 3216×ΔA
2.组织、细菌或细胞中ACL活力计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T = 3216×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T = 3216×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 6.432×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。