ACK Assay Kit (UV Spectrophotometry)

（1）ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸，（3）乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下测定NADH氧化生成NAD+速率，即可反映ACK活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计、1mL石英比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品处理：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0012UV-ES体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0012UV-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0012UV-ES体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0012UV-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
三、测定步骤：
1.紫外分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.工作液的配置：临用前取CB0012UV-B一瓶，加入25mL CB0012UV-A和500μL CB0012UV-C，充分混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用；
3.在1mL石英比色皿中加入100μL样本和900μL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
四、ACK酶活性计算公式：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK (nmol/min /mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 536×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T = 536×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK (nmol/min /10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 1.072×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。