Acid Phosphatase Assay Kit (Spectrophotometry)

在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。

50T/24S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0009S-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0009S-A）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。
2.CB0009S-B置于 37℃ 水浴中预热 30 min。
3.在EP 管中按列表中顺序加入上述试剂：

四、ACP 活性计算：
1.组织中 ACP 活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
ACP (U/mg prot) = [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
ACP (U/g) = [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T= 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷W
注： C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02 mL；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W: 样本质量，g；T：反应时间（min），15 min。
2.血液中 ACP 活性计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
ACP活力 (U/mL) = [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总] ÷V样×V样总÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注： C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02 mL；V样：加入反应体系中上清液体积(mL)，0.020mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间(min)，15 min。

1.CB0009S-B，CB0009S-C，CB0009S-D需4℃避光保存。
2.CB0009S-D变成蓝绿色不能使用。
3.加入CB0009S-D后必须立即混匀，否则显色不完全。
4.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
5.ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5 以下，或5mL血清加入30%醋酸溶液2-3滴，置于 4℃可保存1周。
6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。