Acetyl coenzyme A (Acetyl Co-A) Assay Kit (UV Spectrophotometry)

苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶 A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶 A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶 A 含量和 NADH 的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶 A 含量的高低。

50T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计、天平、低温离心机、恒温水浴锅、1 mL石英比色皿、冰和蒸馏水。
二、乙酰辅酶 A 的提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)：CB0007UV-A体积(mL)为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0007UV-A），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量(g)：CB0007UV-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0007UV-A），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min，用蒸馏水于 340nm 处调零。
2.将工作液置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴锅中预热 10 min。
3.取 920μL 工作液和 100μL 样本至 1mL 石英比色皿，混匀，立即记录 340nm 处 20s 的吸光值 A1 和 80s 时的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
四、乙酰辅酶 A 含量计算：
1.按照样本质量计算：
乙酰辅酶 A 含量(nmol/g鲜重)=(ΔA÷ε÷d)×V反×10⁹÷V样×V提÷W×F=1639.87×ΔA÷W×F
2.按照细菌或细胞密度计算：
乙酰辅酶 A 含量(nmol/10⁴)=(ΔA÷ε÷d)×V 反×10⁹÷V样×V提÷500×F=3.28×ΔA×F
注：ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol；V 反：反应总体积，1.02×10^-3L；V样：加入样本上清体积，0.1mL；V提：加入提取液的体积，1mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌数量，500 万；F：稀释倍数；Cpr：样本蛋白质浓度。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的 BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。