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ACC Assay Kit (Microanalysis)

Name: ACC Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0005M
Rating: 4.5 (1 reviews)

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货号 CB0005M

别名 乙酰辅酶A羧化酶活性检测试剂盒（微量法）

乙酰辅酶A羧化酶 (Acetyl-CoA carboxylase，ACC) 在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

ACC Assay Kit (Microanalysis)

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货号 CB0005M 别名 乙酰辅酶A羧化酶活性检测试剂盒（微量法）

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 2,808	10-12日内发货

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产品操作手册

产品介绍

生物活性

产品描述	乙酰辅酶A羧化酶 (Acetyl-CoA carboxylase，ACC) 在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
别名	乙酰辅酶A羧化酶活性检测试剂盒（微量法）

检测原理

ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。

产品组成

100T/48S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0005M-ES	100mL×1瓶	4℃保存。
CB0005M-A	10mL×1瓶	4℃保存。
CB0005M-B	粉剂×1瓶	4℃保存。
CB0005M-C	粉剂×1瓶	-20℃保存。
CB0005M-D	粉剂×1瓶	4℃保存；用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。
CB0005M-E	粉剂×1瓶	4℃保存；用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。
CB0005M-F	25mL×1 瓶	室温保存。
CB0005M-S	10mL×1 瓶标准磷贮备液（10μmol/mL）	4℃保存。

操作说明

1.自备用品：
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
2.样本的前处理:
1)细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0005M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2)组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0005M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.测定步骤：
1)分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2)酶促反应试剂的配制和预热：在CB0005M-B瓶中加入2.5mL CB0005M-A，充分溶解混匀；在CB0005M-C瓶中加入2mL蒸馏水，充分溶解混匀；将CB0005M-A, CB0005M-B, CB0005M-C在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
3)定磷试剂的配制：按H2O: CB0005M-D : CB0005M-E : CB0005M-F = 2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
4)0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂CB0005M-S 20倍稀释，即取 0.5mL CB0005M-S加9.5蒸馏水，充分混匀。
5)酶促反应：

试剂名称	对照管 (µL)	测定管 (µL)
CB0005M-A	90
CB0005M-B		50
CB0005M-C		40
样本	10	10
37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应30min后，90℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，10000g 25℃离心5min，取上清。

6)定磷：

试剂名称	标准管 (µL)	空白管 (µL)	对照管 (µL)	测定管 (µL)
CB0005M-S (0.5μmol/mL)	20
蒸馏水		20
上清液			20	20
定磷试剂	180	180	180	180
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴30min，冷却至室温，在 660nm处，蒸馏水调零，记录各管吸光值A。标准管、空白管只要做1-2次即可，每个测定管需要设一个对照管。

注：若测定管吸光值大于2，将样品用提取液稀释适当倍数后再进行测定，使吸光值小于2，可提高检测灵敏度，计算公式中乘以相应稀释倍数。

4.ACC活性计算：
1)按组织蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/mg prot) = (C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V样×Cpr)÷T= 10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2)按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/g鲜重) = (C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(W× V样÷V样总)÷T= 10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每小时每500万细菌或细胞产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/10⁴ cell) = (C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(500× V样÷V样总)÷T= 0.02×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注：C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。

注意事项

1.配制试剂时最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

文件下载

CB0005M-乙酰辅酶A羧化酶活性检测试剂盒（微量法） -中文 (1.3 MB)

计算器

摩尔浓度计算器
稀释计算器
配液计算器
分子量计算器

体内实验配液计算器

请在以下方框中输入您的动物实验信息后点击计算，可以得到母液配置方法和体内配方的制备方法：

比如您的给药剂量是10 mg/kg，每只动物体重20g，给药体积100 μL， TargetMol | Animal experiments

一共给药动物10只，您使用的配方为5% TargetMol | reagent

DMSO + 30%PEG300 + 5%Tween 80 + 60%Saline/PBS/ddH₂O ，那么您的工作液浓度为2mg/mL。

母液配置方法: 2 mg 药物溶于 50 μLDMSO TargetMol | reagent

（母液浓度为 40 mg/mL ）, 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度，请先与我们联系。

体内配方的制备方法: 取 50μLDMSO TargetMol | reagent

母液，添加 300 μLPEG300 TargetMol | reagent

混匀澄清，再加 50μLTween80, 混匀澄清，再加 600μLSaline/PBS/ddH₂O TargetMol | reagent

混匀澄清

以上为“体内实验配液计算器”的使用方法举例，并不是具体某个化合物的推荐配制方式，请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。

方案所需的各类助溶剂如： DMSO ， PEG300 / PEG400 ， Tween 80 ， SBE-β-CD ，玉米油等，均可在TargetMol网站点击购买。

剂量转换

对于不同动物的给药剂量换算，您也可以参考更多

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