ACC Assay Kit (Microanalysis)

ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。

100T/48S规格的产品组成如下：

1.自备用品：
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
2.样本的前处理:
1)细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0005M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2)组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0005M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.测定步骤：
1)分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2)酶促反应试剂的配制和预热：在CB0005M-B瓶中加入2.5mL CB0005M-A，充分溶解混匀；在CB0005M-C瓶中加入2mL蒸馏水，充分溶解混匀；将CB0005M-A, CB0005M-B, CB0005M-C在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
3)定磷试剂的配制：按H2O: CB0005M-D : CB0005M-E : CB0005M-F = 2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
4)0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂CB0005M-S 20倍稀释，即取 0.5mL CB0005M-S加9.5蒸馏水，充分混匀。
5)酶促反应：

4.ACC活性计算：
1)按组织蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/mg prot) = (C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V样×Cpr)÷T= 10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2)按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/g鲜重) = (C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(W× V样÷V样总)÷T= 10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每小时每500万细菌或细胞产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/10⁴ cell) = (C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(500× V样÷V样总)÷T= 0.02×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注：C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1.配制试剂时最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0005M-乙酰辅酶A羧化酶活性检测试剂盒（微量法） -中文 (1.3 MB)