6-PGDH Assay Kit (Microanalysis)

6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP+生成 NADPH，NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定 340nm 吸光度增加速率，计算 6PGDH 活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

1.自备用品：
低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
2.试剂预配制:
1)CB0004M-B：临用前加入 2mL CB0004M-A充分溶解备用。
2)CB0004M-C：临用前加入 2mL CB0004M-A充分溶解备用。
3.粗酶液提取：
1)组织：按照组织质量（g）：CB0004M-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0004M-A）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2)细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：CB0004M-A体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0004M-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3)血清、培养液等液体：直接测定。
4.检测步骤：
1)分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2)CB0004M-A置于37℃水浴中保温30min。
3)按顺序加入下列试剂：

5.6PGDH酶活性计算公式：
1)使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
A.按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/mg prot) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T = 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
B.按样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/g) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T= 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷W
C.按细胞数量计算
活性单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/10⁴cell) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×10⁹]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 535.9×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量
D.按液体体积计算
活性单位定义：每毫升液体每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH 酶活性(U/mL) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×10⁹]÷V样÷T = 535.9×(△A测定管-△A空白管)
注： ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，0.0002 L；Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V样：反应体系中加入粗酶液体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，3 min。
2)使用96孔板测定的计算公式如下：
A.按蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/mg prot) = [(△ A测定-△A空白)×V反总÷(ε×d)×10⁶]÷(Cpr×V样)÷T = 1071.8×(△A测定-△A空白)÷Cpr
B.按样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/g) = [(△A测定-△A空白)×V反总÷(ε×d)×10⁶]÷(V样÷V样总×W)÷T = 1071.8×(△A测定-△A空白)÷W
C.按细胞数量计算
活性单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/10⁴cell) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×10⁹]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 1071.8×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量
D.按液体体积计算
活性单位定义：每毫升液体每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。
6PGDH (U/mL) = [(△A测定管-△A空白管)×V反总÷ε÷d×10⁹]÷V样÷T= 1071.8×(△A测定管-△A空白管)
注： ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积，0.0002 L；Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒(C0050)；V样：反应体系中加入粗酶液体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min。

1.样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融。
2.CB0004M-B和CB0004M-C须现配现用，当天未用完试剂保存在 4℃，可保存 2 天。
3.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0004M-6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒(微量法)-中文(1.3 MB)