4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，在333nm下测4-香豆酸CoA生成速率，即可反映4CL活性。

100T/48S规格的产品组成如下：

1.自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。
2.粗酶液提取:
1)细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0002M-ES体积（mL）为500- 1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0002M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2) 组织：按照组织质量（g）：CB0002M-ES体积(mL)为1：5- 10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0002M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.检测步骤：
1)分光光度计或酶标仪40℃预热30min以上，调节波长至333nm，蒸馏水调零。
2)准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
3)样本测定：
A.在CB0002M-B中加入5mL CB0002M-A充分溶解混匀，置于40℃水浴预热10min；现配现用，24h内用完；
B.在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂：

1)用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
A. 按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶A定义为一个酶活力单位。
4CL (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 31.75×ΔA÷Cpr
B. 按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶A定义为一个酶活力单位。
4CL (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 31.75×ΔA÷W
C. 按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶A定义为一个酶活力单位。
4CL (nmol/min/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.063×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：4-香豆酸辅酶A摩尔消光系数，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
2)用96孔板测定的计算公式如下：
A.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的4-香豆酸辅酶A定义为一个酶活力单位。
4CL (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 63.49×ΔA÷Cpr
B.按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶A定义为一个酶活力单位。
4CL (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T = 63.49×ΔA÷W
C.按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶A定义为一个酶活力单位。
4CL (nmol/min/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.127×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：4-香豆酸辅酶A摩尔消光系数，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0002M-4-香豆酸：辅酶A连接酶活性检测试剂盒说明书（微量法）-中文(1.4 MB)