γ-glutamyl-transpeptidase Assay Kit (Microanalysis)

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0110M-A进行冰浴匀浆；8000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞：500 万细胞加入 1mL CB0110M-A，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min，调节波长到 405 nm，蒸馏水调零。
2.工作液置于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴中预热 30min（保证无沉淀）。
3.样本测定，按下表依次加入：

四、γ-GT 活性计算公式：
a. 按微量玻璃比色皿计算：
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(Cpr×V样)÷T=0.506×ΔA÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每克样本每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/g) =ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=0.506×ΔA÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每10⁴个细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.001×ΔA
(4)按液体体积计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/mL) = ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷V样÷T=0.506×ΔA
注： V样：加入样本体积，0.02mL；V提取：加入提取液体积：1mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞数量，500万细胞；ε：对硝基苯胺消光系数，9870L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；10⁶：单位换算系数，1mol=10⁶μmol。
b. 按96孔板计算：
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(Cpr×V样)÷T=1.01×ΔA÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每克样本每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/g) =ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=1.01×ΔA÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每10⁴个细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.002×ΔA
(4)按液体体积计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT (U/mL) = ΔA÷(ε×d)×10⁶×V反总÷V样÷T=1.01×ΔA
注： V样：加入样本体积，0.02mL；V提取：加入提取液体积：1mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞数量，500万细胞；ε：对硝基苯胺消光系数，9870L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；10⁶：单位换算系数，1mol=10⁶μmol。

1.培养细胞中 γ-GT 活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中 γ-GT 的提取时可加CB0110M-A后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。
2.配制好的工作液 2 周内使用完毕。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。