β-xylosidase Assay Kit (Microanalysis)

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm处有特征吸收峰，测定 405nm 光吸收增加速率，可计算 β-木糖苷酶活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、试剂预配制：
CB0106M-A：临用前加入 0.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂建议-20℃分装保存2周，避免反复冻融（1 支粉剂溶解后可做 48S，为了延长使用时间，此产品多给 1 支粉剂）；
粗酶液提取：
1.细菌或真菌样本：先收集样本到离心管内，离心后弃上清；按照样本数量（10⁴ 个）：CB0106M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0106M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.植物样本：按照组织质量（g）：CB0106M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0106M-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 405nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2.标准液的稀释：用CB0106M-B将标准液稀释至0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125 μmol/mL，备用。
3.样本测定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列试剂）：

四、β-木糖苷酶活性计算公式：
根据标准管的浓度(y，μmol/mL)和吸光度ΔA标准(x，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定(x，ΔA测定)带入公式计算样本浓度(y，μmol/mL)。
(1)按蛋白浓度计算：
酶活定义：45℃，pH7.4时，每毫克蛋白质 1min内催化产生 1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性 (U/mg prot) = (y×V样)÷(V样×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr
(2)按样本重量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品1min内催化产生 1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性 (U/g) = (y×V样)÷(W×V样÷V样总)÷T=0.05×y ÷W
(3)按样本数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每10⁴个细胞 1min 内催化产生 1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性 (U/10⁴ cell) = (y×V样)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0001×y
注：V样总：加入提取液体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：样本数量，500万；T：反应时间，20min。

1.吸光度变化应该控制标曲范围内，否则加大样品量或稀释样品，并注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2.样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。