β-AL Assay Kit (Microanalysis)

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀粉酶总活力的测定。
血清（浆）等液体样本：
（1）直接检测α-淀粉酶。
（2）吸取淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀粉酶总活力的测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。
2.标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的标准溶液。
3.CB0246M-A和CB0246V-B 40℃预热10min。
4.测定步骤（在EP管中依次加入下列试剂）：

四、酶活性计算：
标准曲线的绘制：
以标准液的浓度(mg/mL)为x轴，对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔAα代入方程得到x₁(mg/mL)，ΔA总代入方程得到x₂(mg/mL)。
1.α-淀粉酶活性的计算：
(1)按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(U/g 质量)=x₁×V样÷(W×V样÷V样总)÷T=2×x₁÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(U/mg prot)=x₁×V样÷(V样×Cpr)÷T=0.2×x₁÷Cpr
2.总淀粉酶活性计算：
(1).按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性 (U/g 质量)=5×x₂×V样÷(W×V样÷V样总) ÷T=10×x₂÷W
(2).按照蛋白质含量计算 单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。 总淀粉酶活性(U/mg prot)=5×x₂×V样÷(V样×Cpr)÷T=x₂ ÷Cpr
3.β-淀粉酶活性计算：
(1)按照样本质量计算
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(U/g 质量)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=(10×x₂÷W)-(2×x₁÷W)=(10×x₂-2×x₁)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(U/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=(x₂÷Cpr)-(0.2×x₁÷Cpr)
5：总淀粉酶稀释倍数；V样：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V样总：提取液总体积，10mL；Cpr：样 本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。