β-1,3-glucanase Assay Kit (Microanalysis)

β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和 蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0104M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0104M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0104M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0104M-ES），进行冰浴匀浆；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2.标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。
3.样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

注：每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空白管只需做 1-2 次。

四、β-1,3-GA 活性计算：
1.标准曲线的建立：根据标准管吸光度 x(A标准管-A空白管)和浓度(y，mg/mL)建立标准曲线，将 ΔA 带入公式中计算出样本中产生的还原糖的含量y值(mg/mL)。
2.β-1,3-GA 活性计算：
(1)按蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA (U/mg prot) = (y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA (U/g 鲜重) = (y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA (U/10⁴ cell) = ( y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y
注： V1：加入反应体系中样本体积，0.35mL；V2：加入提取液体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万，T：反应时间，60min=1h。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。