α-galactosidase Assay Kit (Microanalysis)

α-GAL 分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 α-GAL 活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0102M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入1mL CB0102M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 15000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0102M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0102M-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2.标准液的处理：用蒸馏水将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL。
3.样本测定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列试剂）：

四、α-GAL 活性计算：
1.标准曲线的建立：
根据标准管的吸光度(y)和浓度(x,nmol/mL)建立标准曲线，将ΔA(y)带入标准曲线中，计算样本生成的产物量x(nmol/mL)。
2.α-GAL活性计算
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GAL 活性(U/mg prot) = [x×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=14x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GAL 活性(U/g 鲜重) = [x×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=14x÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GAL 活性(U/10⁴cell) = [x×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.028x
注： Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.07mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。

1.提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。