购物车
- 全部删除
您的购物车当前为空
还可以
问用磁珠免疫沉淀后获得的蛋白量低？
答a. 蛋白质被降解。建议：加入蛋白酶抑制剂。
b. 所使用的磁珠量不够。建议：提高捕获免疫复合物所使用的磁珠量。
c. 样品中的目标蛋白量不够。建议：提高抗原样品量。
问免疫沉淀试剂盒中的Elution Buffer是什么成分？后续可以做质谱吗？
答Elution Buffer含有甘氨酸，呈酸性条件。洗脱产物可以进行质谱分析。可以在洗脱时加入NaOH进行中和，强酸或强碱会导致产物变性。
问用磁珠进行免疫沉淀实验，抗原没有免疫沉淀下来？
答a. 样品中所含的抗原过少，不足以被检测。建议：通过SDS-PAGE或蛋白免疫印迹验证裂解液中蛋白的表达和/或裂解效率；如果需要，加大样品量。
b. Washing Buffer中的成分干扰了抗原与抗体的结合。建议：使用其它缓冲液进行免疫沉淀和漂洗（例如，含有0.5% CHAPS的TBS）。
问在免疫共沉淀（IP）实验中，目标蛋白分子量发生变化的原因？
答复合物形成：目标蛋白可能与其他蛋白结合，形成复合物，从而改变其分子量。
蛋白降解：目标蛋白可能被酶降解，导致分子量变化。
蛋白修饰：目标蛋白在免疫共沉淀前后可能发生了修饰，如磷酸化或乙酰化，影响分子量。
解决方案：若目标蛋白在免疫共沉淀前后分子量发生变化，可以进行验证实验，如Western blot或质谱分析。此外，在实验前可对样品进行处理，如使用蛋白酶抑制剂，避免过度处理样品，尽量减少目标蛋白的降解和修饰。
问用磁珠免疫沉淀后，检测有多条非特异条带？
答有非特异性的蛋白结合在磁珠上。建议：在Washing Buffer中加入50-350mM NaCl。加大洗脱力度和次数。
问超声应使用什么仪器？
答建议使用“超声清洗仪”，不推荐用“超声破碎仪”。
问抑制剂是否可以高温灭菌？
答大部分产品均通过化学方法合成，反应条件一般在 50-80℃ 之间，因此不建议使用高温灭菌法进行灭菌，建议用 0.22 μm 滤膜过滤灭菌。
问抑制剂母液的储存方式？
答母液配置完成后，一般储存于 -80℃，可以存 1 年以上。建议多分装几管，避免反复冻融，常用的存于 4 度，可放一周以上。
问如何稀释工作液？
答根据您的工作液浓度，计算母液所需要稀释的倍数和所需母液的体积。建议用水、生理盐水、PBS等溶剂进行稀释，如果是细胞实验，可以使用培养基。
取适当的溶剂缓慢加入到母液中，直到达到您的工作液浓度，可以通过涡旋或者移液枪轻轻吹打帮助混匀。
我们的化合物大部分是脂溶性的，所以在使用 PBS 或者培养基等稀释工作液的时候，会有沉淀析出，这些都是正常现象，大多时候可以通过超声完全溶解。
工作液建议现配现用！
问得到的杀死细胞的 IC50 与网页上 IC50 差距较大怎么办？
答您所测试的IC50是指细胞的增殖抑制实验（半抑制率），细胞增殖抑制实验 IC50值，和网页上的靶点IC50其实是不同的意义。文献里和网页上 IC50其实往往是指对于靶点无细胞实验的抑制率，这样的实验一般是通过激酶或者蛋白纯化实验做出来的，nM 级别的浓度比较常见，但是细胞的增殖抑制实验 IC50 是指细胞的半致死率，同时牵涉到细胞的代谢以及渗透，一般浓度会高一些。
另外，同一个化合物对不同细胞模型的效果也是不同的，建议尝试增加孵育量、延长孵育时间。
比如您的给药剂量是 10 mg/kg ，每只动物体重 20 g ，给药体积 100 μL ， 
评论内容