MitoSOX Red TFA (Mito-hydroethidine TFA) is a fluorescent probe that specifically targets mitochondria in living cells.MitoSOX Red is susceptible to oxidation by superoxide, but is not easily oxidized by other ROS or RNS-generating systems.MitoSOX Red acts as a fluorescent indicator and can be used for live cell imaging.

使用方法
一、 溶液制备
1. 储备液： MitoSOX Red TFA 通常溶解于 DMSO（dimethyl sulfoxide，二甲基亚砜）中，制成储备液，常见浓度为 1 mM。 储存储备液时，应置于 -20°C 避光保存，并避免反复冻融以保持稳定性。
2.工作溶液： 将储备液稀释至所需浓度，一般在 1–5 µM 范围内，使用适当的缓冲液，如 PBS 或培养基。 建议新鲜配制工作溶液，以确保最佳效果。
二、细胞染色步骤
1. 细胞准备： 对于贴壁细胞，将细胞培养在适当的玻璃载片或培养板上。对于悬浮细胞，使用合适的培养容器。
确保细胞健康且处于指数生长期，以获得最佳染色效果。
2. 染色步骤：
1）将 MitoSOX Red 工作溶液直接加入细胞培养液中，染色时间通常为 10–30 分钟。染色时间可根据细胞类型和实验要求进行优化。
2）在染色过程中，需避免光照以防止荧光信号的衰减。
3） 洗涤： 染色完成后，去除染料，并使用 PBS 或适当的培养基洗涤细胞，去除未结合的染料。
4） 荧光显微镜观察： 使用荧光显微镜观察细胞，激发波长通常为 510 nm，发射波长约为 580 nm（红色荧光），可用来观察线粒体中的超氧化物。
5） 线粒体超氧化物检测 MitoSOX Red 可用于评估线粒体氧化应激和超氧化物的产生；荧光强度与线粒体内超氧化物的水平相关，因此可以用来研究线粒体功能障碍、氧化应激及相关病理过程。
注意事项
1.光敏性:MitoSOX Red 对光敏感，应避免长时间暴露在强光下，并储存在避光环境中以防止荧光信号的衰减。
2. 毒性:使用适当的浓度以避免细胞毒性。MitoSOX Red 在推荐浓度下通常是安全的，但过高的浓度可能会引起细胞损伤，特别是在长期实验中。
3.存储:MitoSOX Red 储备液应在避光条件下存放于 -20°C。避免反复冻融，因为这可能会影响探针的稳定性和性能。
4. 线粒体膜电位:线粒体膜电位的变化会影响 MitoSOX Red 的摄取。因此，在实验前应确保线粒体膜电位正常，以确保有效的染色。