Knightinol产品问题解答问Cell Counting Kit-8 (CCK-8)水浴加热后,吸光度很低,是不是不能水浴加热?
答加完CCK8之后只需要放置在37度恒温培养箱中就可以了,不用水浴加热。吸光度低可能是活细胞数量较少,或者孵育时间较短。
问请问 Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 加多少到细胞培养液里?
答细胞培养液中直接加入 1/10 体积的 Cell Counting Kit-8 (CCK-8),充分混合,保证孔中颜色均一性,但不可有气泡产生。96 孔板,每 100 μL 培养液加入 10 μL 检测试剂。
问请问 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)外周一圈需要铺满细胞吗?
答不建议铺满外周的细胞,外周建议加 PBS 防止内层挥发。
问请问下你们公司的CCK8试剂, 对于一般肿瘤细胞来说加后建议孵育多久。吸光值在多少左右正常?
答一般是1-4 h,具体时间的话需要根据您的细胞情况和预实验结果来确定。一般吸光值在0.8-1.2左右测定会比较好。
问请问CCK8能放-80℃吗?
答可以,注意避免反复冻融。
常见问题解答问Cocktail 系列的使用方法?
答在室温下解冻,开盖前请低速离心一下,以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100(v/v)稀释至溶液样品(细胞裂解液或组织提取液)。
问三款 RIPA 裂解液有什么区别?
答RIPA 裂解液(强)、RIPA 裂解液(中)、RIPA 裂解液(弱)的有效裂解成分、裂解强度不同,建议查询官网,有三款RIPA裂解液的比较表。
问在做加药实验时,药物对 CCK8 测定是否有影响?如何解决?
答有时会有影响。如果药物具有还原性,会和 CCK-8 发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入 CCK-8,测定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加 CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加 CCK-8 之前更换培养基,去掉药物的影响。
问使用 CCK8 进行实验后,发现读值低,不变色、没差异等,应该怎么办?
答CCK8 在孵育 1-4 小时后,OD 读值在 1-2 之间为佳,线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题,通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。
问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久?
答这个我们暂时没有准确的数据,因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后,不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解,加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话,一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月,冻融三次;但时间长了或者冻融次数多了的话,蛋白还是会发生降解的,不同蛋白降解时间不一样的。
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