Gly-Pro-AMC hydrobromide (Gly-Pro-AMC HCl) is a specific fluorescent dye used in cytofluorescence assays to detect Dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) activity.

Gly-Pro-AMC hydrobromide（50 µM；20分钟；37℃）可作为一种特异性荧光底物，用于检测DPP-IV活性[1]。其荧光检测条件为：激发波长350 nm，荧光发射光谱检测波长450 nm[1]。

细胞裂解液中DPP-4 酶比活力测定
a.溶液配制：在避光环境中，将 Gly-Pro-AMC hydrobromide 粉末用 DMSO 溶解得到 25 mmol/L 的浓储液，并用缓冲液稀释至 500 μmol/L 备用。同样地，将荧光标准品 AMC 粉末用 DMSO 溶解得到 25 mmol/L 的浓储液，并用缓冲液分别稀释至 160、80、40 和 20 μmol/L 备用。
b.操作步骤：
1.向培养状态良好的细胞加入 PBS 并用刮刀刮下收集入无菌 EP 管中，4 ℃、200 g 条件下离心 5 min， 弃上清，加入 3 mL 50 mmol/L Tris-HCl 缓冲液重悬细胞。
2.于冰上向 96 孔板各孔中加入 125 μL 上述配制的不同浓度的 AMC 标准品溶液，再分别向其余测试孔中加入 10、20、30、40 和 50 μL 的细胞裂解液，并用缓冲液补齐体积至75 μL。最后向各测试孔中加入 50 μL 500 μmol/L的Gly-Pro-AMC hydrobromide 底物溶液使体系总体积为 125 μL。
3.将 96 孔板置于预热至 37 ℃ 的多功能酶标仪中开始反应，立即测定各孔的相对荧光单位激发波长（λex=380 nm， 发射波长λem=460 nm）；在随后的 30 min 内，每隔 5 min 测定一次。
4.根据测定结果的标准曲线，对酶比活力进行计算。