Amido Black 10B (Naphthol Blue Black) is a highly toxic azo dye for staining proteins and is commonly used to stain proteins on polyacrylamide gels and agarose gels.

使用方法
一、 试剂准备：
母液和工作液的配置：Amido Black 10B 通常以固体染料的形式提供。实验前需要将其溶解在水或50%甲醇溶液中，常用的浓度范围为0.1%至0.5%（w/v），具体浓度可根据实验要求调整。
注意事项：染料溶解时，也可以使用甲醇和醋酸的混合液（通常是1:1的比例）来提高蛋白质结合效果。
二、聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质染色：
凝胶准备：完成电泳后，取出凝胶并用蒸馏水简单冲洗，以去除多余的缓冲液。
1.染色过程：将凝胶浸入准备好的Amido Black溶液中，通常染色时间为30分钟到1小时，根据实验需要也可以缩短（15-分钟）。
2.染料与蛋白质结合后，会产生深蓝色或黑色的复合物。
3.洗涤：
1）染色完成后，用脱色液（通常是7%醋酸和5%甲醇，或仅使用7%醋酸）彻底洗涤凝胶，去除未结合的染料。
2）洗涤时间通常为30分钟到1小时，期间需要更换脱色液。
3）蛋白质条带应清晰可见，并与透明的凝胶背景形成对比。
4可视化：
1）洗涤后，可以通过常规光照或使用凝胶成像系统观察并记录染色结果。
2）使用扫描仪或凝胶文档系统，可以在大约600–650 nm的波长下定量吸光度值来分析染色强度。

三、琼脂糖凝胶上的蛋白质染色：
琼脂糖凝胶电泳的操作与聚丙烯酰胺凝胶相同，使用相同的染色和脱色方法。
四、数据分析：
1.可以通过蛋白质条带的染色强度来估算蛋白质的浓度。通过与分子量标准对比，可以确定特定蛋白质的大小。
2.使用密度计或成像软件可以进一步定量条带的强度，用于实验组与对照组的比较分析。
注意事项：
1.毒性： Amido Black 10B是有毒的染料，在操作时应采取适当的安全措施，佩戴手套、实验服和护目镜，确保在通风良好的环境中操作。
2.适当处置： 根据实验室安全规程妥善处理Amido Black溶液和凝胶。
3.染色时间： 染色时间可能会因蛋白质的含量和大小而有所不同，需注意控制染色时间，避免过度染色。
4.背景染色： 如果脱色不彻底，可能会出现背景染色，影响条带的可见性。务必彻底脱色。