方法：采用稳定表达萤火虫荧光素酶的LLC/luc小鼠肺癌细胞及MDA-MB-231/luc人乳腺癌细胞，以0.1–250 μM浓度梯度孵育AkaLumine hydrochloride，加入底物后1分钟使用IVIS Spectrum检测生物发光。
结果：该底物在2.5 μM低浓度即达最大信号，而D-荧光素和CycLuc1则呈剂量依赖性增加。[1]

方法：采用心内注射MDA-MB-231-luc细胞建立骨转移模型的裸鼠，AkaLumine hydrochloride以3 μmol剂量静脉注射，于成像前0.25–2小时单次给药，溶剂配方未明确。结果：AkaLumine hydrochloride在胸部及膝关节检测到荧光信号，但信号较模糊，分辨率低于P800SO3。[2]
方法：在 BALB/C 裸鼠皮下移植表达不同荧光素酶的 HEK 293T 细胞模型中验证 AkaLumine hydrochloride 体内活性，经腹腔注射给药，剂量 50 mg/kg（33 mM 生理盐水溶解），底物注射后 30 分钟内以 30 秒采集时长动态成像，设 D-LH2 等为底物对照。结果：其与 Akaluc 配对发光峰值 660 nm，与其他荧光素酶配对达近红外区，且 Akaluc/AkaLumine hydrochloride 组合发光亮度显著高于 Akaluc/D-LH2，Luc2 与该底物配对也展现较高发光信号。[3]