一、纤维素酶活性检测

1. 制备底物溶液：将 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-cellobioside 溶解在适当的缓冲溶液中，浓度通常在0.5-1 mM之间。常用的缓冲溶液包括柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 5.0-7.0）或者Tris-HCl缓冲液（pH 7.5-8.5）。
2. 加入样本：将待测试的样本（例如含有纤维素酶的细菌培养液或提取液）加入到底物溶液中。样品中可能含有β-葡萄糖苷酶等相关酶。
3. 反应条件：将反应体系孵育在适宜的温度（如37°C）下，反应时间通常为30分钟到2小时。酶催化反应会产生蓝色产物。
4. 终止反应：通过添加适当的化学试剂（如酸性缓冲液）来终止反应，防止酶的进一步活性。
5. 观察和分析：通过肉眼或显微镜观察样品中的蓝色产物。蓝色产物的出现表明纤维素酶的活性。可以通过定量分析蓝色染色的强度来评估酶的活性。
   二、纤维生物转化研究
6. 培养微生物：在适当的培养基中培养纤维降解微生物，如纤维素分解的真菌或细菌。
7. 加入底物：加入5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-cellobioside溶液。
8. 反应观察：通过颜色变化来监测降解反应的进行。反应产物的颜色可以帮助判断微生物是否具有纤维素降解能力。
   三、 高通量筛选
9. 样品准备：将大量微生物样本（如不同菌株或基因工程菌株）分批处理。
10. 底物反应：将5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-cellobioside溶液与样品混合。
11. 颜色检测：利用自动化设备检测不同样品中的蓝色反应，快速筛选出高效的纤维素降解菌株或酶。
    四、 酶活性测定
12. 准备底物溶液：溶解5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-cellobioside于缓冲液中。
13. 加入待测酶液：加入含有待测纤维素水解酶或其他相关酶的溶液。
14. 观察反应结果：根据颜色变化评估酶的活性。