2-(4-Hydroxyphenylazo)benzoicacid is a spectrophotometric probe that shows changes in absorption spectra upon binding to proteins and binds to bovine serum proteins.

使用方法
1. 储存液配置：配制储备液时，可使用去离子水或适量的乙醇，浓度范围通常为 1–10 mM。
2.操作步骤：
结合实验：
1. 蛋白质与探针的结合：
1）将目标蛋白质（如牛血清白蛋白，BSA）溶解在适当的缓冲液中（如 pH 7.4 的 PBS 缓冲液）。
2）按一定比例加入 2-(4-Hydroxyphenylazo)benzoic Acid，确保其最终浓度适合吸收光谱的测定（如 10–50 µM）。
2.孵育条件：将混合体系在室温或 37°C 下孵育 10–30 分钟，以确保探针与蛋白质充分结合。
3. 吸收光谱检测：使用分光光度计在 350–500 nm 范围内扫描吸收光谱变化。
探针与蛋白质结合后，其特征吸收峰（通常在 400 nm 左右）会发生显著变化。
4. 数据分析：
比较自由探针与蛋白质结合后的吸收光谱，确定结合动力学参数。
使用滴定实验（如逐渐增加探针或蛋白质浓度）来绘制结合曲线，并计算结合常数.
注意事项：
1）该探针对 pH 敏感，应使用合适的缓冲液稳定实验条件。
2）防止光照引起化合物降解或蛋白质变性。
3）在测定前，应确保溶液无气泡和颗粒，以免干扰光谱检测。