Coomassie Blue Conventional Staining Kit

• 经典方法：采用传统的考马斯亮蓝R-250染色方案，染色效果稳定可靠。
• 操作简便：常规染色脱色方法可在2-3 h后观察到蛋白条带，快速染色脱色方法可在20 min内观察到蛋白条带，为获得清晰条带，则需要延长染色脱色时间。
• 背景清晰：优化的染色与脱色配方，有效降低背景，提高条带清晰度。
• 兼容性强：适用于多种类型的SDS-PAGE凝胶。
• 成本低廉：试剂配方经济实用，适合日常实验室使用。

SDS-PAGE 凝胶中蛋白条带的显色检测和可视化，用于观察蛋白的存在、分子量及表达情况。

一、常规染色与脱色步骤
1.电泳结束后，将凝胶取出，置于适量的考马斯亮蓝染色液中，确保染液完全覆盖凝胶表面。
2.放置于水平摇床或侧摆摇床上，室温下缓慢摇动进行染色，时间建议为1 h以上。
注：实际染色时间可根据凝胶厚度与环境温度适当调整：较厚的凝胶或低温条件下建议延长染色时间，较薄的凝胶或高温环境中则可适当缩短。通常，当凝胶与染液颜色趋于一致、几乎难以分辨时，说明染色已基本完成。染色持续2–4 h或更久不会对结果造成不良影响。
3.倒出染色液，可收集并重复使用2–3次。
4.加入适量脱色液，确保完全覆盖凝胶。
5.继续在摇床上室温缓慢摇动进行脱色，时间通常为4–24 h。建议在此期间更换脱色液2–4次，直至背景充分清除，蛋白条带清晰可见。一般在1–2 h内即可观察到条带显现。
注：脱色时可在容器中放入一小片吸水纸，帮助吸附游离染料、加快脱色过程。脱色时间过长可能导致条带颜色变浅。
6.脱色完成后，凝胶可置于去离子水中短期保存用于拍照等后续操作。如需避免凝胶因吸水膨胀，建议置于20%甘油水溶液中保存。长期保存可通过干胶方式处理。

二、快速染色与脱色步骤
1.电泳结束后，将凝胶立即置入适量考马斯亮蓝染色液中，并使用微波炉加热至接近沸腾或轻微沸腾，然后停止加热。
注：建议控制加热强度：高浓度凝胶（>10%）的结构较坚固，不易破裂；而低浓度凝胶（<10%）需避免剧烈沸腾，以防损伤。
2.在染液尚热时，将凝胶置于摇床上轻柔摇动，室温反应10–30 min,，视蛋白量和条带清晰度灵活调整时间。
3.倒出染液，可保存重复使用 2–3 次。
4.向容器中加入足量脱色液，覆盖凝胶。
5.重复加热至脱色液接近沸腾后停止，再次摇动脱色10–30 min。此时多数情况下即可观察到蛋白条带。
6.根据需要更换脱色液并重复加热+摇动步骤，直至背景清除，蛋白条带显示清晰。
7.脱色完成后，凝胶可置于去离子水中短期保存用于拍照等后续操作。如需避免凝胶因吸水膨胀，建议置于20%甘油水溶液中保存。长期保存可通过干胶方式处理。

室温保存，一年有效。

1. 长时间静置后染料可能沉降，使用前请充分混匀，以保证染色效果一致。
2. 微波加热时，请使用专用耐热容器，避免使用普通塑料容器，以防变形或泄漏。
3. 脱色过程中若使用吸水纸帮助脱色，请勿遮盖蛋白条带区域，以免影响条带显色效果。
4. 常规染色法虽耗时较长，但具备较高的灵敏度与染色稳定性，适用于对条带清晰度要求较高的实验。快速染色法虽然速度快，但在微波加热过程中可能存在局部暴沸风险，容易导致低浓度凝胶破裂或碎裂，操作时务必控制加热程度。同时，高温还可能导致试剂中乙酸挥发，为安全起见，建议在通风橱内进行加热步骤。
5. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
6. 为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。

• C0186-考马斯亮蓝常规染色试剂盒说明书-中文 (1.4 MB)