Collagenase Type II通常用于从心脏、骨骼、肝脏、胸腺、唾液腺和软骨中制备原代细胞[1]。
使用说明
（1）溶解：将II型胶原酶在Hank's平衡盐溶液（HBSS）中溶解至1mg/mL的浓度，然后使用0.2μm滤器进行无菌过滤。常用浓度为0.5-2.5mg/mL（用于组织和细胞分散），1-2mg/mL（用于软骨消化），具体浓度可根据实验条件或文献建议进行调整。
（2）处理组织或细胞层：将小块组织或细胞层用胶原酶溶液覆盖，并在37°C下孵育。将组织切成3-4mm大小的块，用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS溶液洗涤。将胶原酶溶液添加至组织块，确保其完全浸没，保持37°C孵育4-18小时（时间依据组织类型而有所不同）。可以使用水平摇床，并可添加3mM的CaCl₂以提高消化效率。
（3）检查细胞分离情况：使用显微镜观察细胞是否成功分离。
（4）离心和洗涤：细胞分离后应立即进行离心，并使用缓冲液洗涤两次，以去除残留的胶原酶，因为新鲜培养基无法停止酶的活性。
（5）重悬和培养：将细胞重悬于新鲜培养基中，并继续培养。

以白兔为实验对象，在膝关节实验中，右膝注射Collagenase Type II（4 mg/mL，250 μL），并于3天后重复注射，左膝则注射生理盐水作为对照。结果显示，右膝出现水肿和厚度增加，8天后软骨表面粗糙且退化加重，I型和II型胶原蛋白表达异常。血液中仅在第8和16天时观察到中性粒细胞短暂增加，无系统性炎症反应，表明该方法仅引起局部软骨退化。该诱导的骨关节炎模型能够模拟人类骨关节炎（OA）的病理过程，且不会引发类风湿性关节炎的系统性炎症[2]。在角膜实验中，右眼（实验组）用Collagenase Type II（200 μL，5 mg/mL）处理30分钟，左眼（对照组）则用不含胶原酶的溶液进行处理。结果显示，术后实验组未出现明显炎症反应，与对照组相比，实验组的平均角膜曲率显著增加，中央角膜厚度显著降低。特定畸形下，实验组的平均应力和弹性模量也显著降低，表明Collagenase Type II可以有效模拟圆锥角膜[3]。