Thiazole Orange is a dye that can be used for reticulocyte analysis.

使用方法
一、溶液制备
1. 储备液：将 Thiazole Orange 溶解于 DMSO 或乙醇中，制备浓度为13mg/ml 的储备液。由于该染料对光敏感，需避光操作和储存。
2. 工作液：根据实验要求，将储备液稀释至工作浓度，通常为 1mg/ml，稀释时可使用适当的缓冲液（如 PBS）。
二、操作步骤
1.与寡核苷酸偶联：
(1) Thiazole Orange 可通过氨基反应性功能基团（如 NHS 酯或异硫氰酸酯）与修饰的寡核苷酸或连接臂进行共价偶联。
(2) 偶联完成后，通过高效液相色谱（HPLC）或凝胶电泳纯化标记的寡核苷酸。
(3) 通过吸收和荧光测量验证偶联效率。
2.网织红细胞分析：
(1) 将红细胞悬液（使用 PBS 或等渗缓冲液制备）制备好。
(2) 添加工作浓度（通常为 1mg/ml）的 Thiazole Orange，并在 37°C 孵育 60 分钟，使其与网织红细胞内的 RNA 结合。
(3) 使用流式细胞仪或荧光显微镜对染色的细胞进行分析，选择合适的激发波长（~510 nm）和发射波长（~530 nm）。
3.荧光杂交探针应用：
(1)在杂交实验中使用标记的寡核苷酸探针检测特定的核酸序列。
(2)优化杂交条件（如温度、缓冲液成分）以确保探针与目标序列的特异性结合。
(3)使用荧光计或荧光成像系统测量荧光信号。
注意事项：
1.光敏性：Thiazole Orange 对光敏感，使用时需避免长时间暴露在强光下。
2.储存条件：储备液应存储在 -20°C 密闭容器内，以减少水分暴露并防止降解。避免反复冻融。
3.兼容性：Thiazole Orange 与核酸结合力强，避免使用含有洗涤剂或高盐浓度的溶液，这可能会减少其与核酸的相互作用。

H2O: < 0.1 mg/mL (insoluble)

DMSO: 12.25 mg/mL (25.7 mM), Sonication is recommended.

10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: 1 mg/mL (2.1 mM), Sonication is recommeded.