Rhodamine 123 is a fluorescent dye (λex=503 nm, λem=527 nm).

R123荧光的强度在50 μM浓度时达到峰值，由于自猝灭作用，在更高浓度时降至零[1]。

使用方法
一、溶液配制
1. 母液的配制：将Rhodamine 123溶解于无水DMSO或乙醇中，配制成1-5 mM的储备液。​
注意事项：溶解时避免剧烈搅拌或振荡，以防荧光淬灭。
2.工作液配置：将储备液用适当的培养基稀释至所需的工作浓度，通常为1-2 μM。
二、操作步骤
1. 细胞准备：
1）在载玻片上培养细胞，细胞密度应为5×10^4至5×10^5个/mL。​
2）用PBS或Hank’s液洗涤细胞，去除培养基残留。
2. 染色：将工作浓度溶液加入细胞中，在37℃避光孵育30分钟至1小时。​
3. 洗涤：
1）去除染料溶液，用培养基或PBS洗涤细胞，去除未结合的染料。
2）如需固定细胞，可加入10%福尔马林缓冲液孵育15-20分钟，随后用PBS洗涤。​
4. 观察：使用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞，Rhodamine 123在波长约507 nm处激发，529 nm处发射绿色荧光。​
注意事项：
1）操作时需戴手套，避免皮肤或粘膜与试剂接触。​
2）孵育和储存过程中应避免光照，以防荧光淬灭。​
3）染色完成后，应立即进行荧光检测分析。