5-CFDA (5-Carboxyfluorescein diacetate)(5-Carboxyfluorescein diacetate) is membrane-permeant. It can be loaded into cells via incubation and hydrolyzed by intracellular esterases to 5-carboxyfluorescein that is used for labeling human intervertebral disk cells in vitro for fluorescence microscopy.

使用方法
一、 溶液准备
1.储备液：将 5-CFDA 溶解于无水 DMSO，制备浓度为 1–10 mM 的储备液。
注意事项：操作时需避光，将储备液分装后储存于 -20°C，避免反复冻融以保证稳定性。
2. 工作液：将储备液稀释至最终使用浓度（1–10 µM）。稀释时可使用无酚红的细胞培养基或 PBS缓冲液。
二、操作步骤
1.细胞准备：
按实验需求收集待处理的贴壁或悬浮细胞，调整至合适的细胞密度；使用 PBS 或无酚红培养基冲洗细胞 1–2 次，以去除可能干扰实验的物质。
2.染色反应：
将配制好的 5-CFDA 工作液加入细胞悬液或培养基中，确保染料与细胞充分接触：通常以 1–10 µM 的浓度，在 37°C 条件下避光孵育 15–30 分钟。
3.清洗步骤：使用 PBS 或新鲜培养基清洗细胞 2–3 次，去除未被细胞吸收的多余染料。
4. 检测与结果分析
1）荧光信号检测：采用荧光显微镜、流式细胞仪或荧光读板机进行检测。推荐的参数为：
激发波长： 490–495 nm
发射波长： 515–525 nm
2） 数据处理：
比较实验组和对照组的荧光强度，以评估细胞活性、追踪细胞或分析其他生物学动态变化。