High-Affinity Iodoacetyl Agarose

• 物理化学稳定性良好
• 配基不易脱落
• 耐用性强
• 使用便捷

• 固定含有巯基的多肽、蛋白或其他配体，用于纯化相应的抗体。

以下为常用的缓冲液成分，使用时可根据需要进行调整。缓冲液在使用前最好使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。

1. 含巯基样品偶联
1)样品准备：使用偶联缓冲液溶解含巯基的蛋白或多肽，使其最终浓度约为1 mg/mL。
2)层析柱平衡：将空层析柱固定于铁架台上，缓慢加入巯基偶联琼脂糖凝胶，使其均匀沉降至柱底。随后，加入3倍柱体积的偶联缓冲液，以约1 mL/min的流速流出，重复该步骤两次，以充分平衡凝胶。
3)蛋白偶联：封闭层析柱底部后，向柱内加入含巯基的蛋白或多肽样品，比例为1 mL凝胶对应1 mL样品。盖紧柱盖，并在摇床上室温孵育30 min，以促进偶联反应。
4)洗脱杂质：固定层析柱于铁架台上，打开底部盖子，使溶液流出并让凝胶沉降。随后，加入3倍柱体积的偶联缓冲液，以1 mL/min的流速洗涤。收集流出液，测定A280值，并与偶联前的数据对比，以评估偶联效率。
5)封闭处理：封闭层析柱底部，加入1倍柱体积的封闭缓冲液，并在摇床上室温孵育30 min。孵育后，重新固定层析柱，打开底部盖子，使封闭液流出，让凝胶沉降。
6)储存：若需立即使用，可直接进行下一步操作；若需长期保存，先用3倍柱体积的结合/洗杂缓冲液清洗，再加入1倍柱体积的存储缓冲液，并存放于2-8℃，避免光照，严禁冷冻。

2. 抗体过柱纯化
1)柱平衡：向层析柱中加入5倍柱体积的结合/洗杂缓冲液，使液体流出，同时让凝胶充分沉降至柱底。
2)抗体结合：缓慢加入样品，以约0.5 mL/min的流速流经柱体。收集流出液，并可通过SDS-PAGE评估纯化效率。如有需要，可重复或循环上样，以提高结合效果。
3)去除杂质：使用约50倍柱体积的结合/洗杂缓冲液，以1.5 mL/min的流速冲洗，或借助紫外检测仪监测，直至A280值达到稳定状态。
4)洗脱目标蛋白：完成洗涤后，加入5-10倍柱体积的洗脱缓冲液，控制流速约1 mL/min，并监测A280变化，确保洗脱完全。收集洗脱液，并按1/10体积比例加入中和缓冲液，以调整pH。

3. SDS-PAGE检测
使用SDS-PAGE对纯化过程中得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品进行检测，以评估纯化效果。

4. 凝胶再生与储存
使用5倍柱体积的结合/洗杂缓冲液彻底清洗，以去除残留的洗脱缓冲液。随后加入1倍柱体积的存储缓冲液，并存放于2-8℃避光保存。严禁冷冻，以保持凝胶活性。

4℃，2年。

1. 避免冷冻本产品。
2. 凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥。
3. 在从保存管中取出琼脂糖凝胶之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0154-高亲和力巯基偶联琼脂糖凝胶说明书-中文(0.98 MB)