High-Affinity Iodoacetyl Agarose

Name: High-Affinity Iodoacetyl Agarose
Brand: TargetMol
SKU: C0154
Price: 900 CNY
Availability: InStock
Rating: 4.5 (4 reviews)

产品编号 C0154 High-Affinity Iodoacetyl Agarose

TargetMol 的高亲和力巯基偶联琼脂糖凝胶由碘乙酸衍生物共价连接到 4% 交联的琼脂糖基质上，它可高效、便捷地与含巯基的多肽、蛋白或其他生物配体结合，通过巯基与碘乙酸基团反应，形成稳定的巯醚键，从而实现配体的固定，并用于后续的亲和纯化。每毫升琼脂糖凝胶可固定超过 1 mg 的含巯基的 7 氨基酸多肽。

规格	价格	库存
5 mL	¥ 1,067	5日内发货
10 mL	¥ 1,794	5日内发货
50 mL	¥ 6,992	5日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

问在做加药实验时，药物对 CCK8 测定是否有影响？如何解决？

答有时会有影响。如果药物具有还原性，会和 CCK-8 发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入 CCK-8，测定 450 nm 的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加 CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加 CCK-8 之前更换培养基，去掉药物的影响。

问三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别

答成分功能均不一样，具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点，如果只想买一支又不确定哪个合适的话，推荐C0002。如果想要更全面的抑制，推荐C0004。

问TargetMol蛋白酶抑制剂是否可以和其他公司的磷酸酶抑制剂一起使用？

答可以一起使用。

问使用 CCK8 进行实验后，发现读值低，不变色、没差异等，应该怎么办？

答CCK8 在孵育 1-4 小时后，OD 读值在 1-2 之间为佳，线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题，通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。

问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久？

答这个我们暂时没有准确的数据，因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后，不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解，加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话，一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月，冻融三次；但时间长了或者冻融次数多了的话，蛋白还是会发生降解的，不同蛋白降解时间不一样的。

产品特点

物理化学稳定性良好
配基不易脱落
耐用性强
使用便捷

产品应用

固定含有巯基的多肽、蛋白或其他配体，用于纯化相应的抗体。

产品信息

高亲和力巯基偶联琼脂糖凝胶	特性
基质	高度交联的4%琼脂糖微球
平均粒径	90 μm (45‐165 μm)
配体	碘乙酸衍生物
吸附量	> 3 mg 羊 IgG/mL 凝胶
pH 稳定性	pH 5‐10
浓度	50% (v/v) 悬液
保存溶液	1×PBS, pH 8.0 (含20%乙醇)

自备试剂

以下为常用的缓冲液成分，使用时可根据需要进行调整。缓冲液在使用前最好使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。

试剂	可选配方
偶联缓冲液	50 mM Tris‐HCl, 5 mM EDTA-Na, pH 8.5
封闭缓冲液	50 mM L-Cysteine hydrochloride用偶联缓冲液溶解
储存缓冲液	1×PBS, pH 8.0 (含20%乙醇)
结合/洗杂缓冲液	PBS，pH 8.0
洗脱缓冲液	0.1 M Glycine, pH 2‐2.5
中和缓冲液	1 M Tris‐HCl, pH 8.5

操作说明

1. 含巯基样品偶联
1)样品准备：使用偶联缓冲液溶解含巯基的蛋白或多肽，使其最终浓度约为1 mg/mL。
2)层析柱平衡：将空层析柱固定于铁架台上，缓慢加入巯基偶联琼脂糖凝胶，使其均匀沉降至柱底。随后，加入3倍柱体积的偶联缓冲液，以约1 mL/min的流速流出，重复该步骤两次，以充分平衡凝胶。
3)蛋白偶联：封闭层析柱底部后，向柱内加入含巯基的蛋白或多肽样品，比例为1 mL凝胶对应1 mL样品。盖紧柱盖，并在摇床上室温孵育30 min，以促进偶联反应。
4)洗脱杂质：固定层析柱于铁架台上，打开底部盖子，使溶液流出并让凝胶沉降。随后，加入3倍柱体积的偶联缓冲液，以1 mL/min的流速洗涤。收集流出液，测定A280值，并与偶联前的数据对比，以评估偶联效率。
5)封闭处理：封闭层析柱底部，加入1倍柱体积的封闭缓冲液，并在摇床上室温孵育30 min。孵育后，重新固定层析柱，打开底部盖子，使封闭液流出，让凝胶沉降。
6)储存：若需立即使用，可直接进行下一步操作；若需长期保存，先用3倍柱体积的结合/洗杂缓冲液清洗，再加入1倍柱体积的存储缓冲液，并存放于2-8℃，避免光照，严禁冷冻。

2. 抗体过柱纯化
1)柱平衡：向层析柱中加入5倍柱体积的结合/洗杂缓冲液，使液体流出，同时让凝胶充分沉降至柱底。
2)抗体结合：缓慢加入样品，以约0.5 mL/min的流速流经柱体。收集流出液，并可通过SDS-PAGE评估纯化效率。如有需要，可重复或循环上样，以提高结合效果。
3)去除杂质：使用约50倍柱体积的结合/洗杂缓冲液，以1.5 mL/min的流速冲洗，或借助紫外检测仪监测，直至A280值达到稳定状态。
4)洗脱目标蛋白：完成洗涤后，加入5-10倍柱体积的洗脱缓冲液，控制流速约1 mL/min，并监测A280变化，确保洗脱完全。收集洗脱液，并按1/10体积比例加入中和缓冲液，以调整pH。

3. SDS-PAGE检测
使用SDS-PAGE对纯化过程中得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品进行检测，以评估纯化效果。

4. 凝胶再生与储存
使用5倍柱体积的结合/洗杂缓冲液彻底清洗，以去除残留的洗脱缓冲液。随后加入1倍柱体积的存储缓冲液，并存放于2-8℃避光保存。严禁冷冻，以保持凝胶活性。