Calcein (Fluorexon) is a fluorescent dye and self-quenching probe that used as an indicator of lipid vesicle leakage, and a complexometric indicator for titration of calcium ions with EDTA, and for fluorometric determination of calcium.

使用方法
一、 溶解与配制
1.母液的配置：Calcein溶解于无水DMSO、乙醇或PBS。溶解浓度可以根据实验的要求进行调整，通常在1-10 mM范围内。
2.工作液的配置：用于细胞染色时，将溶解后的Calcein加入到培养的细胞中，通常使用浓度在1-5 μM之间（具体浓度需根据实验优化）。
二、 细胞染色
1.细胞在加入Calcein后，通常需要在37°C下孵育30分钟至1小时。
2.标记后可使用荧光显微镜或流式细胞仪进行分析。
3.Calcein染料通过细胞膜的渗透性进入细胞，在存在钙离子的条件下，它会与钙离子结合并发出绿色荧光。
三、脂囊泡渗漏检测
Calcein在脂囊泡渗漏实验中可用于评估细胞膜的完整性。当脂囊泡膜受损时，Calcein会从囊泡中泄漏出来，导致荧光信号的变化。因此，它可以作为检测膜渗漏和膜稳定性的指示剂。
四、钙离子滴定与测定：
1.Calcein也可以用作EDTA钙离子滴定和荧光测定钙离子的指示剂。Calcein与钙离子结合形成荧光复合物，因此，通过测定荧光强度，可以推断溶液中钙离子的浓度。
2.在钙离子测定实验中，Calcein的荧光强度与钙离子的浓度呈线性关系，通常可以在吸收/发射光谱为490/515 nm的条件下进行检测。
五、去除背景信号
在进行荧光成像或流式细胞分析时，可以使用适当的洗涤步骤去除细胞表面或培养基中的未结合Calcein染料，以减少背景荧光。
注意事项：
1.Calcein溶液应储存在-20°C并避光保存。
2.避免反复冻融以保持其荧光稳定性。