6-Carboxyfluorescein (6-FAM) contains a carboxylic acid functional group, facilitating reactions with primary amines through carbodiimide activation.

6-FAM 标记寡核苷酸探针应用于荧光原位杂交 （FISH）
一、溶液配制：
1.母液配置：将6-FAM 溶解于 DMSO 或乙醇中，配制成 1-10 mM 的母液；（建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存）
2.工作液的配制：使用 PBS 或其他适合的缓冲液稀释 6-FAM 母液，通常为 1-10 µM；（根据实验需求选择合适的工作液浓度，现配现用）
二、操作步骤：
1.样本准备：制备鸡胚胎细胞的染色体样品，包括秋水仙碱处理、低渗膨胀和甲醇-冰醋酸固定。
2.预处理：染色体经 RNase A、胃蛋白酶及甲醛处理。
3.杂交：6-FAM 标记的寡核苷酸作为探针溶解于含有大肠杆菌 tRNA 的杂交缓冲液 （50% 甲酰胺， 2×SSC ，10% 葡聚糖硫酸酯） 中，浓度为 20 ng/μL。DNA 和探针共同变性后，在湿盒中室温过夜杂交；
4.洗涤与复染：杂交后的载玻片依次在 2×SSC 中清洗三次，再经 70%-96% 的乙醇系列脱水，晾干后用含有 DAP I 的抗淬灭剂封片；
5.观察与分析：使用配备单色 CCD 相机 DFC350FX 和适当滤光片的 Leica DM4000B 荧光显微镜观察样品，并利用 QFISH 软件捕捉和处理染色体彩色图像。