Granule-bound starch synthase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

GBSS 催化 ADPG 与淀粉引物 (葡聚糖) 反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成 ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP⁺还原为 NADPH，其中 NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比，通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量，可以计算 GBSS 活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计、石英比色皿、研钵、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
称取 0.1~0.2g 组织（建议称取约 0.1g 组织），加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.在 EP 管中按顺序加入下列试剂：

四、AAO 活性计算公式：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T×稀释倍数 = 522×ΔA÷Cpr

2.按照样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性 (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T×稀释倍数 = 522×ΔA÷W
注： V反总：反应体系总体积，5.7×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.15 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.71；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。