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常见问题解答
Granule-bound starch synthase Assay Kit (Microanalysis)
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产品编号 CB0197M
别名 结合淀粉合成酶（GBSS）活性检测试剂盒（微量法）
颗粒结合淀粉合成酶（granule-bound starch synthase, GBSS, EC 2.4.1.21）是决定直链淀粉合成的关键酶，单子叶植物GBSS包含两种同工酶，分别是GBSSI和GBSSII，双子叶植物只有GBSSII一种同工酶。GBSS可以通过α-1,4-D-糖苷键将ADPG中的葡萄糖残基添加到葡萄糖的非还原端，能够延长葡萄糖的直链。是与发育中的丹菲结合的唯一有活力的蛋白。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100 T | ¥ 6,300 | 4-6日内发货 |
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
检测原理
GBSS 催化 ADPG 与淀粉引物 (葡聚糖) 反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成 ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH，其中 NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比，通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量，可以计算 GBSS 活性。
产品规格
100T/96S规格的产品组成及保存条件：
| 编号 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| CB0197M-ES | 100mL×2 瓶 | 4℃保存； |
| CB0197M-A | 40mL×2 瓶 | 4℃保存； |
| CB0197M-B | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存；临用前加入 14mL CB0197M-A充分混匀备用；用不完的试剂 4℃ 保存一周； |
| CB0197M-C | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存；临用前加入 8mL CB0197M-A充分混匀备用；用不完的试剂 4℃保 存一周； |
| CB0197M-D | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存；临用前加入 10mL CB0197M-A充分混匀备用；用不完的试剂 4℃ 保存一周； |
| CB0197M-E | 液体×1 支 | -20℃保存；临用前加入 500μL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试 剂 4℃保存一周； |
| CB0197M-F | 粉剂×1 支 | -20℃保存；临用前加入 500μL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试 剂 4℃保存一周； |
| 工作液配制： | 按照CB0197M-D：CB0197M-E：CB0197M-F = 100：5：5 比例混均即可， | |
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
操作说明
一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
称取 0.1~0.2g 组织（建议称取约 0.1g 组织），加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃ 离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。
三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.在带盖的 EP 管中按顺序加入下列试剂：
| 试剂名称 | 测定管 （μL） |
|---|---|
| 样本 | 75 |
| CB0197M-B | 135 |
| 混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却， | |
| CB0197M-C | 75 |
| 混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 25℃ 离心 10min，取上清液待测， | |
3.在微量石英比色皿/96孔板中按顺序加入下列试剂：
| 试剂名称 | 测定管 （μL） |
|---|---|
| 上清液 | 150 |
| 工作液 | 110 |
| 混匀后立即 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。 | |
四、GBSS 活性计算公式
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS (nmol/min/mg prot) =
[ΔA × V反总 ÷ (ε × d) × 109] ÷ (V样 × Cpr) ÷ T × 稀释倍数
= 528 × ΔA ÷ Cpr
蛋白定量检测建议使用本公司：BCA Protein Assay Kit (C05-02001)
2.按照样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性 (nmol/min/g 鲜重) =
[ΔA × V反总 ÷ (ε × d) × 109] ÷ (W × V样 ÷ V样总) ÷ T × 稀释倍数
= 528 × ΔA ÷ W
注：V反总：反应体系总体积，2.85 × 10-4 L；
ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22 × 103 L/mol/cm；
d：比色皿光径，1 cm；
V样：加入样本体积，0.075 mL；
V样总：加入提取液体积，1 mL；
T：反应时间，2 min；
稀释倍数：1.73；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS (nmol/min/mg prot) = [ΔA × V反总 ÷ (ε × d) × 109] ÷ (V样 × Cpr) ÷ T × 稀释倍数 = 1056 × ΔA ÷ Cpr
2.按照样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性 (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA × V反总 ÷ (ε × d) × 109] ÷ (W × V样 ÷ V样总) ÷ T × 稀释倍数 = 1056 × ΔA ÷ W
V反总：反应体系总体积，2.85 × 10-4 L；
ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22 × 103 L/mol/cm；
d：96 孔板光径，0.5 cm；
V样：加入样本体积，0.075 mL；
V样总：加入提取液体积，1 mL；
T：反应时间，2 min；
稀释倍数：1.73；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量
注意事项
1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
引用文献
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