TMRM Perchlorate (T668) is a cell-permeant cationic lipophilic red fluorescent dye (λex=530 nm, λem=592 nm).

TMRM Perchlorate 是一种荧光探针（激发光，530±21 nm；发射光，592±22 nm）。在TMRM Perchlorate存在下，添加谷氨酸后荧光信号轻微下降，这表明线粒体内膜极化增加。在TMRM Perchlorate（2 μM）存在下，与复合物I底物耦联的呼吸或添加复合物Ⅱ底物后的呼吸减少了27%[1]。低浓度TMRM Perchlorate（50到500 nM）处理海马培养细胞1到3小时，能选择性地染色神经元及其下层的胶质细胞中的线粒体。高浓度TMRM Perchlorate（1到25 μM）处理可快速选择性染色线粒体，并在5到10分钟后达到饱和。TMRM Perchlorate低浓度（50到200 nM）不诱导细胞凋亡，而较高浓度（0.5和2.5 μM）则增强细胞凋亡（KD=500 nM）[2]。

一、线粒体膜电位测量
实验步骤：
1. 准备TMRM溶液： 将TMRM Perchlorate (T668) 溶解在 DMSO 中制备储备液（通常为1 mM）。然后将储备液稀释至工作浓度，通常在10 nM至200 nM之间，取决于实验需要。
2.细胞孵育： 将TMRM溶液加入细胞中，在37°C下孵育20-30分钟。在此期间，染料进入细胞并累积在线粒体中，染料会发出红色荧光。
3.洗涤（可选）： 孵育后，用新鲜培养基或PBS洗涤细胞，去除多余的染料。
4.荧光测量： 使用荧光显微镜或流式细胞仪进行荧光测量，激发波长为530 nm，发射波长为592 nm。荧光强度反映了线粒体膜电位。
5. 数据分析： 高荧光强度表示较高的线粒体膜电位，而荧光强度降低则表明线粒体膜电位丧失。
二、凋亡与线粒体功能障碍研究
实验步骤：
1.处理细胞： 使用凋亡诱导剂、线粒体解偶联剂或其他可能影响线粒体膜电位的化学物质处理细胞。
2.加入TMRM溶液： 将TMRM染料加入处理过的细胞中，孵育20-30分钟。
3.荧光测量： 按上述方法测量荧光强度。荧光强度的减少表明线粒体膜电位的下降，可能表示细胞正经历凋亡或应激。
4.结果分析： 分析荧光强度的变化。如果荧光强度显著降低，则表明线粒体膜电位丧失，这是凋亡的标志之一。
注意事项：
1.浓度优化： TMRM的最佳工作浓度可能因细胞类型而异。建议通过实验来确定最佳浓度。
2.活细胞染色： TMRM用于活细胞染色，操作时需轻柔处理细胞，避免在洗涤步骤中破坏线粒体结构。
3.避免光漂白： TMRM对光漂白敏感。在样品处理和成像时应尽量减少光照暴露，以确保可靠的结果。
4.对照实验： 在实验中应包含适当的对照，如使用线粒体解偶联剂（例如FCCP）处理细胞，这可作为线粒体膜电位丧失的阳性对照。