NBD-Cl (NBD chloride) is a nonfluorescent compound that becomes highly fluorescent after reaction with amino or thiol groups.

一、 蛋白质标记
实验步骤：
1.准备 NBD-Cl 溶液： 将 NBD-Cl 溶解在适当的有机溶剂中，如二甲基亚硫酰胺（DMSO），制备浓度通常为 1-10 mM 的储备液。
2.与蛋白质反应： 将 NBD-Cl 溶液与含有自由巯基或氨基的蛋白质样品混合。该反应通常在室温或略微碱性的条件下进行，以促进与巯基的反应。
3.孵育： 反应孵育时间通常为 30 分钟至 1 小时，确保反应完全。
4.纯化： 反应完成后，可以通过透析或过滤去除未反应的 NBD-Cl，确保只留下标记的蛋白质。
5. 荧光测量： 使用荧光分光光度计测量荧光发射，通常激发波长为 460 nm，发射波长约为 530 nm，以确认标记效率。
二、巯基定量
实验步骤：
1. 准备 NBD-Cl 溶液： 将 NBD-Cl 溶解在 DMSO 或其他适当溶剂中，制备储备液。
2.样品准备： 将 NBD-Cl 添加到含有自由巯基的生物样品或缓冲液中。NBD-Cl 的浓度应优化，以确保完全与巯基反应。
3. 孵育： 反应孵育时间通常为 10-30 分钟，允许巯基与 NBD-Cl 反应。
4.荧光测量： 使用荧光仪测量发射光谱，发射波长通常为 530 nm，激发波长为 460 nm。荧光强度与样品中巯基的数量成正比。
三、氨基检测
实验步骤：
1.准备 NBD-Cl 溶液： 将 NBD-Cl 溶解在 DMSO 或其他适当的溶剂中，制备储备液。
2. 样品准备： 将 NBD-Cl 溶液加入到含有自由氨基的样品中（例如小分子或肽）。
3.孵育： 反应通常在室温下进行，孵育时间为 15-30 分钟。
4.荧光测量： 使用荧光仪测量发射光谱，发射波长通常为 530 nm，激发波长为 460 nm，以检测氨基的标记。