Hoechst 34580 xHCl(23555-00-2(free base) is a cell-permeable fluorescent dye, is used for staining DNA and nuclei.

Hoechst 34580 是一种治疗阿尔茨海默病的良好候选物，通过抑制 Aβ 的形成发挥作用。在 37°C 下，与 50 μM Aβ42 溶液共孵育 70 h 的 Hoechst 34580 浓度分别为 100、25、12.5、3.125、0.78、0.1 及 0.01 μM。结果显示，Hoechst 34580 能够以剂量依赖的方式抑制 Aβ42 的聚集。通过测定 Hoechst 34580 的浓度以维持 Aβ42 浓度得到的 IC50 值为 0.86±0.05 μM。

使用方法
一、溶液配置
1.储备液：将 Hoechst 34580 溶解于DMSO中，制备 1mg/ml 的储备液。
注意事项：储备液应避光操作，分装后存放于 -20°C，避免反复冻融以保持染料活性。
2. 工作液：在实验前，将储备液稀释至最终使用浓度（通常为 1–10 µg/mL）。
注意事项：建议使用适纯的DMEM培养基或 PBS（不含酚红）进行稀释，以确保最佳染色效果。
二、操作步骤
1.细胞准备：
贴壁细胞：培养细胞至合适密度后，用 PBS 缓冲液清洗 1–2 次，去除培养基残留物。
悬浮细胞：直接收集细胞，离心弃去上清后用 PBS 重悬。
2.染色反应：
1）将 Hoechst 34580 工作液重悬细胞或孵育贴壁细胞中，确保充分混匀。
2）通常染色浓度为 1–10 µg/mL，在 37°C 下避光孵育 10–30 分钟。
3. 清洗步骤：染色后用 PBS 缓冲液清洗细胞 2–3 次，去除未结合的染料。
3. 检测与分析
荧光检测：使用荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞中的荧光信号。
Hoechst 34580 对 DNA 的亲和性较高，可与细胞核中特异结合，呈现明亮的蓝色荧光。
推荐的检测参数：
激发波长： 355–360 nm
发射波长： 465–480 nm
4. 数据分析：
观察并拍摄荧光图像，分析核染色强度或细胞周期分布。可结合阳性和阴性对照组进行比较，验证实验结果。