使用方法:

1. 溶剂选择
   DNP-X, SE 易溶于无水 DMSO 或 DMF，确保溶剂无水以避免琥珀酰亚胺酯的水解。
2. 样品准备
   目标分子：需含有游离胺基（如蛋白质的赖氨酸侧链或 N 末端胺基）。
   缓冲液选择：推荐使用 pH 8.3 左右的无胺缓冲液（如碳酸盐或磷酸盐缓冲液）。避免 Tris 或其他含胺缓冲液，以免干扰反应。
3. 偶联反应
   a. 配制 DNP-X, SE 的 DMSO 溶液（浓度通常为 10 mM）。
   b. 在缓冲液中加入目标分子，然后逐滴加入 DNP-X, SE 溶液（以目标分子摩尔量的 10–20 倍过量使用试剂）。
   c. 在室温或略低于室温（4°C）下反应 30 分钟到 2 小时，避免光照和高温。
   d. 调控反应的 pH 值在 8–9 之间，以维持琥珀酰亚胺酯的活性。
4. 反应终止和纯化
   a. 用缓冲液调节反应溶液的 pH 到中性（7.0）。
   b. 采用以下纯化方法之一移除未反应的 DNP-X, SE 和副产物：
   透析：适用于大分子标记（如蛋白质）。
   凝胶过滤柱（如 Sephadex G-25）。
   HPLC：适合高精度的纯化。
5. 验证标记
   UV-Vis 分光光度法：DNP-X 的吸收峰通常位于 360–400 nm 范围内。
   FRET 检测：在配对 Trp 或 Tyr 作为供体时，检测能量转移的淬灭效果。
   注意事项
   a.储存条件：DNP-X, SE 应存放于 -20°C，避光、防潮，必要时可在惰性气体（如氮气）保护下保存。
   b.避免交叉反应：确保目标分子样品不含其他游离胺基或反应性基团干扰标记。
   c.优化条件：根据目标分子的特性调整试剂浓度、反应时间和温度，以最大限度提高标记效率。