DiBAC4(3) is a voltage-sensitive fluorescent dye (λem=505 nm, λex=490 nm).

在HEKBKα中，通过DiBAC4(3)明显观察到10 μM Evans blue (EB) 引起的膜超极化，而3 mM 四乙基铵氯化物引起的膜电位变化相比之下通过微电极测量的方式出现得更慢。通过微电极和DiBAC4(3)测量，膜超极化达到峰值的时间分别为2.3±0.9秒和35.0±2.6秒。

使用方法
一、溶液制备
1.储备液：DiBAC4(3) 可以溶解在 DMSO 或其他适当的溶剂中，制备浓度为 1-10 mM 的储备液。
2.工作液：根据实验需要，将储备液稀释至工作浓度，通常为 1–5 µM，使用适当的缓冲液或培养基（例如 PBS 或 RPMI）。
二、操作步骤
1. 细胞染色：将细胞接种到合适的培养皿中，培养至所需的密度。将 DiBAC4(3) 工作液加入到含细胞的培养基中。
2.在 37°C 下孵育 15–30 分钟。孵育时间可能根据实验条件有所不同。孵育过程中应避免光照，以防染料降解。
3.洗涤：孵育后，用新鲜的培养基或 PBS 洗涤细胞，去除未结合的染料。
4. 此时细胞可用于荧光检测。
5. 荧光检测：激发与发射波长：DiBAC4(3) 可通过 490 nm 波长的光激发，发射波长大约为 505 nm。
荧光强度与膜电位的变化相关。荧光强度增加通常与超极化相关，而荧光强度降低则与去极化相关。
显微镜/流式细胞仪：对于荧光显微镜，使用配有适当滤光片的显微镜来观察发射波长 505 nm 的荧光；对于流式细胞仪，可以在 505 nm 范围内测量荧光，分析单个细胞膜电位的变化。
6. 应用领域：
1）膜电位研究：DiBAC4(3) 被广泛用于监测活细胞膜电位的变化，这对于离子通道活性、药物筛选和细胞可兴奋性研究至关重要。
2）心脏与神经研究：它常用于心脏细胞、神经元及其他可兴奋细胞的电生理学研究。
3）毒理学与细胞应激：DiBAC4(3) 还可用于评估毒性因子对细胞膜电位的影响。
注意事项：
1.光敏性：DiBAC4(3) 对光敏感，样本应在暗处或弱光环境中处理。
2.毒性：尽管在工作浓度下通常是安全的，但高浓度可能会影响细胞活力。因此，建议为每种细胞类型优化浓度。