DFHBI is a small molecule, resembles the chromophore of green fluorescent protein (GFP). Spinach and DFHBI are essentially nonfluorescent when unbound. The Spinach-DFHBI complex is brightly fluorescent both in vitro and in living cells.

一、RNA标记与成像
1.准备Spinach RNA：合成含Spinach适配体序列的目标RNA，采用体外转录或RNA合成方法。
2. DFHBI溶解：将DFHBI溶解于DMSO或水中，制成1-10 mM的储备液，使用时稀释至1-50 µM范围。
3. 复合物形成：将Spinach RNA与DFHBI混合，在适当的缓冲条件（如Tris-HCl、MgCl₂等）下孵育，以形成高荧光复合物。
3.成像：使用荧光显微镜观察，激发波长为470-490 nm，发射波长为510-530 nm。
二、活细胞实验
1. Spinach RNA表达：使用含Spinach序列的质粒转染细胞，或者通过体内RNA合成系统表达目标RNA。
2.加入DFHBI：向细胞培养基中添加DFHBI（终浓度通常为10-50 µM），孵育10-30分钟。
3. 荧光检测：在荧光显微镜或荧光成像仪下观察，监测RNA的定位和动态。
4 荧光检测与定量
1） 荧光测量：使用荧光分光光度计定量Spinach-DFHBI复合物的荧光强度，用于分析RNA的量或动态变化。
2）优化条件：在实验中优化缓冲液、离子浓度（尤其是Mg²⁺浓度）和pH，以获得最佳荧光信号。

DMSO: 85 mg/mL (337.01 mM), Sonication is recommended.

10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: 1 mg/mL (3.96 mM), Sonication is recommeded.