BCDA (5-bromo-4-chloroindoxyl acetate) is a chromogenic substrate of esterase. It is used to detect the activity of esterase.

使用方法
一、试剂准备
1.母液配置：使用适当的溶剂（如二甲基亚砜（DMSO）或有机溶剂）将 BCDA 溶解成一定浓度的溶液。通常准备的浓度为 0.1–1 mM。
2.工作液配置：根据实验要求调整溶液的浓度，常见的浓度范围为 0.2 mM 到 1 mM。溶液可以在实验前新鲜配制。
二、操作步骤
1. 样品准备：
样品可以是含有酯酶的溶液、细胞或组织提取液。对于细胞或组织样本，可能需要进行离心或其他处理以去除细胞碎片，得到适合酯酶活性测定的清洁样本。
2.反应步骤：
1）底物添加：将一定体积的 BCDA 溶液加入样品中，通常以与酯酶样品的体积比为 1:1。
2）反应条件：将反应体系在适宜的温度（一般为 37°C）下孵育一定时间（通常为 30–60 分钟）。具体的孵育时间可以根据实验要求进行优化。
3）酯酶催化反应：在酯酶的作用下，BCDA 会发生水解，释放出溴色和氯色的产物，通常会生成明显的蓝色或绿色产物，这些产物可以通过分光光度计检测。
3.测量：
1）使用分光光度计在 620 nm 或 600 nm 波长处测量吸光度（OD 值）。酯酶催化生成的颜色产物与酯酶活性呈正相关，吸光度值越高，表示酯酶活性越强。
2）可根据标准曲线计算样品中的酯酶活性。
4. 数据分析：
1）通过样品的吸光度与空白对照进行比对，计算出酯酶活性。
2）可通过测定多个不同时间点的吸光度，得到酯酶的反应动力学信息。
注意事项：
1.溶解性：BCDA 在水中的溶解度较差，因此通常需要使用有机溶剂如 DMSO 配制溶液。
2.光敏性：BCDA 对光敏感，因此在操作和储存过程中应避免强光照射，以防止底物降解。
3.实验条件：酯酶活性可能受 pH 值、温度等因素的影响，应确保实验条件的稳定性和一致性。