7-BFC (7-Benzyloxy-4-(trifluoromethyl)coumarin) is a coumarin-like fluorescent substrate that serves as a biomarker for cytochrome P 450 and can be used to study CYP isoforms and cytochrome P 450 metabolism.

一、CYP 活性检测
1. 材料准备：
1）7-BFC 溶液：通常配置为 1-10 µM 的溶液，溶解在适当的溶剂中（如 DMSO 或 PBS）。
2）酶源：CYP 亚型（如 CYP3A4、CYP2D6 等）表达系统，或者使用人类肝脏 microsomes。
3）反应缓冲液：通常使用包含 NADPH 的磷酸盐缓冲液（pH 7.4），用于模拟体内代谢环境。
4）荧光探测设备：如荧光分光光度计，激发波长 405 nm，发射波长 460 nm（具体波长取决于实验设置）。
2. 步骤：
1）准备反应体系：将 7-BFC 溶液与 CYP 亚型或肝脏微粒体混合，并加入 NADPH 作为电子供体。
2）反应孵育：在 37°C 下孵育反应体系 15-30 分钟，以便 7-BFC 发生代谢反应，产生荧光。
3） 荧光检测：使用荧光分光光度计检测产物的荧光强度，通常设定激发波长为 405 nm，发射波长为 460 nm。
4） 数据分析：通过测定荧光强度的变化，可以评估细胞色素 P450 活性及其对 7-BFC 的代谢效率。
二、CYP 亚型特异性检测
1. 材料准备：
1）CYP 亚型抑制剂：如 ketoconazole（CYP3A4 的抑制剂），或特定亚型的抑制剂。
2）代谢产物分析：可以通过高效液相色谱（HPLC）等技术进一步分析代谢产物。
3.步骤：
1）设定实验组：分别添加不同的 CYP 抑制剂来鉴定特定 CYP 亚型对 7-BFC 的代谢作用。2）荧光检测与数据分析：比较不同抑制剂和未处理样本的荧光信号强度，进一步确认特定 CYP 亚型的代谢特征。
注意事项：
1）反应条件：温度、pH 和缓冲液的选择会影响反应的效率，应根据实验要求优化。
2）溶剂影响：溶解 7-BFC 时，应选择对实验系统无影响的溶剂，避免对 CYP 活性产生抑制。
3）荧光稳定性：7-BFC 的荧光信号较为稳定，但应避免长时间暴露于强光下。