VE Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

VE还原Fe³⁺为Fe²⁺，Fe²⁺与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在530nm有特征吸收峰。

50T/24S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、研钵、离心机、漩涡震荡仪。

二、粗酶液提取：
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.2g，加入1mL CB0143V-ES）加入提取液，充分匀浆后用提取液定至2mL，在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议1000万细胞加入2mL CB0143V-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。
3.血清：取0.2mL，加1.9mL CB0143V-ES，漩涡仪混匀上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。

三、测定步骤：
1.可见分光光度计预热30分钟，调节波长到530nm，蒸馏水调零。
2.在EP管中依次加入下列试剂：

四、VE计算公式：
标准曲线：y = 0.022x + 0.0065，R² = 0.9978
1.按蛋白浓度计算
VE含量 (μg/mg prot) = (ΔA-0.0065)÷0.022×V反总÷(V样×Cpr) = 181.8×(ΔA-0.0065)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
VE含量 (μg/g 鲜重) = (ΔA-0.0065)÷0.022×V反总÷(V样×W÷V样总) = 181.8×(ΔA-0.0065)÷W
3.按细胞数量计算
VE含量 (μg/10⁴ cell) = (ΔA-0.0065)÷0.022×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) = 181.8×(ΔA-0.0065)÷细胞数量
4.按液体体积计算
VE含量 (μg/mL) = (ΔA-0.0065)÷0.022×V反总÷V样×20 = 1818×(ΔA-0.0065)
注：V反总：反应总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.5mL；V样总：加入提取液体积，2mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.最低检出限为29.5μg/g。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。