UGP Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: UGP Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0293UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0293UV

别名 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）也称UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 3,024	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0293UV-ES	50mL×1瓶	4℃保存；
CB0293UV-A	25mL×1瓶	4℃保存；
CB0293UV-B	粉剂×1瓶	-20℃保存；临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0293UV-C	粉剂×1 瓶	-20℃保存；临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0293UV-D	粉剂×1 瓶	-20℃保存；临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0293UV-E	5mL×1瓶	4℃保存；

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计、微量石英比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵、蒸馏水。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0293UV-ES）加CB0293UV-ES，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0293UV-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在微量石英比色皿/96孔板中依次加入）:

试剂名称	测定管（µL）
CB0293UV-A	500
CB0293UV-B	100
CB0293UV-C	100
CB0293UV-D	100
CB0293UV-E	100
粗酶液	100
充分混匀，记录340nm处30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，ΔA=A2-A1

四、UGP活性计算：
1.按样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/mg prot) = [ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/g 鲜重) = [ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每10⁴个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/10⁴ cell) = [ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.643×ΔA
4.按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP (U/mL) = [ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹]÷V样÷T = 321.54×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500万。