Tannase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

使用抗氧化剂没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，在270nn下测定底物PG反应前后的吸光度变化，计算单宁酶酶活力。

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0209UV-A体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0209UV-A），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到270 nm，蒸馏水调零。
2.操作表：

注意：可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。

四、TAN活力单位的计算：
标准条件下测定回归方程为y = 0.0058x + 0.0044，R2 = 0.9994；x为PG含量(µmol/L)，y为吸光值。
1.按样本体积计算
单位的定义：40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位。
TAN活性(µmol/min/mL) = (ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷V样÷T = 34.48×(ΔA-0.0044)
2.按照蛋白浓度计算
单位的定义：40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN活性(µmol/min/mg prot) = (ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T = 34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr
3.按照样本鲜重计算
单位的定义：40℃下每克样品每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN活性(µmol/min/g鲜重) = (ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T = 34.48×(ΔA-0.0044)÷W
注：V反总：反应体系总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。