Pyruvate Assay Kit (Microanalysis)

丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品处理（丙酮酸提取）：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0112M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0112M-ES），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），静置 30min，8000g，25℃离心 10min，取上清待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0112M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0112M-ES），进行冰浴匀浆，静置 30min，8000g，25℃离心 10min，取上清待测。
3.血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：CB0112M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）加入 1mL CB0112M-ES），进行冰浴匀浆，静置 30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。
2.标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0μg/mL。
3.在微量石英比色皿或 96 孔板，按照下表操作：

四、丙酮酸含量计算：
1.标准曲线的绘制： 以各标准溶液浓度为 x 轴，以 A标准为 y 轴做标准曲线，得到方程 y=kx+b； 将A测定带入方程求 x 丙酮酸钠含量 (µg/mL) 值。
2.按照血清(浆)体积计算
丙酮酸含量 (μg/mL) = (x×V1)÷[V1÷(V2+V3)×V3]=11x
3.按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量 (μg/mg prot) =(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr
4.按照样品质量计算
丙酮酸含量 (µg/g 鲜重) = (x×V1)÷(W×V1÷V2)=x÷W
5.按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量 (μg/10⁴ cell) = (x×V1)÷(500×V1÷V2)= x÷500
注： V1：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清(浆)体积，0.1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

1.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。