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Polyphenol Oxidase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

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货号 CB0115V

别名 多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒(可见分光光度法)

多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase, PPO)(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

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货号 CB0115V 别名 多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒(可见分光光度法)

多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase, PPO)(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

PPO能够催化邻苯二酚产生醌,后者在410nm有特征光吸收。

Handling Instruction | TargetMol 产品规格

50T/24S规格的产品组成及保存条件:

编号 规格 储存条件
CB0115V-ES 60ml×1 4℃保存,用前混匀;
CB0115V-A 40ml×1 4℃保存
CB0115V-B 10ml×1 4℃避光保存

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品处理:
1.细菌、细胞或组织样品的制备:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;500 万细菌或细胞加入 1mL CB0115V-ES,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.组织样品:称取约 0.1g 组织,加入 1mL CB0115V-ES,进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3.血清(浆)或果汁样本的处理:取 0.1mL血清(浆)或果汁加入 1mL CB0115V-ES,进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

三、测定步骤:
1.分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 410nm,蒸馏水调零。

试剂名称 测定管 (µL) 对照管(µL)
CB0115V-A 600 600
CB0115V-B 150 150
待测样本 150
煮沸的待测样本 150
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)中准确水浴 10min 后,95℃水浴 5min,充分混匀,冷却至室温,10000g,常温离心 10min,取上清,410nm 处检测测定管和对照管吸光度;计算ΔA=A测定管-A对照管。
2.样本测定,在 EP 管中按照下表操作 注意:每个测定管需要设一个对照管。可以在不同对照管中加入不同样品的待测液,然后集中进行 5min 95℃水浴处理。

四、PPO 活性计算:
1.血清(浆)或果汁 PPO 活性
单位的定义:每分钟每 mL 血清(浆)或果汁在每 mL 反应体系中使 410nm处吸光值变化0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/mL) = ΔA×V反总÷(V 液× V样÷V样总)÷0.01÷T = 60×ΔA÷V 液
2.组织、细菌或细胞 PPO 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T = 60×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T = 60×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/104 cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T = 0.12×ΔA
注: V反总:反应体系总体积,0.9mL;V 液:加入血清(浆)或果汁体积,0.1mL;V样:加入样本体积,0.15mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量(g);500:细胞或细菌总数,500 万。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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